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                    D-熒光素鉀鹽使用說(shuō)明書(shū)

                    發(fā)布時(shí)間:2017/11/13      點(diǎn)擊次數(shù):3346

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                    D-Luciferin, Potassium Salt D-熒光素鉀鹽*(超純)

                    產(chǎn)品名稱

                    貨號(hào)

                    規(guī)格

                    保存

                    價(jià)格(元)

                    D-Luciferin, Potassium Salt D-熒光素鉀鹽*(超純)

                    C6301L1330

                    25 mg

                    -20

                    650

                     

                    產(chǎn)品描述

                    D-Luciferin Free acid, potassium salt, and sodium salt *UltraPure Grade*D-熒光素(D-Luciferin)是熒光素酶(Luciferase)的常用底物,普遍用于整個(gè)生物技術(shù)領(lǐng)域,特別是體內(nèi)活體成像技術(shù)。其作用機(jī)制是在ATP和熒光素酶的作用下,熒光素(底物)能夠被氧化發(fā)光。當(dāng)熒光素過(guò)量時(shí),產(chǎn)生的光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)性(見(jiàn)下圖)。將攜帶熒光素酶編碼基因(Luc)的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入細(xì)胞后,導(dǎo)入研究動(dòng)物如大小鼠體內(nèi),之后注入熒光素,通過(guò)生物發(fā)光成像技術(shù)(BLI)來(lái)檢測(cè)光強(qiáng)度變化,從而實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)疾病發(fā)展?fàn)顟B(tài)或藥物的治療功效等。也可以利用ATP對(duì)此反應(yīng)體系的影響,根據(jù)生物發(fā)光強(qiáng)度的變化來(lái)指示能量或生命體征。

                    D-熒光素也常用于體外研究,包括熒光素酶和ATP水平分析;報(bào)告基因分析;高通量測(cè)序和各種污染檢測(cè)。目前市場(chǎng)上有三種產(chǎn)品形式,D-熒光素(游離酸),D-熒光素鈉鹽,以及D-熒光素鉀鹽。這三種產(chǎn)品主要的差別在于溶解特性上。D-熒光素(游離酸)水溶性以及緩沖體系的溶解性都很弱,除非溶于弱堿如NaOH和KOH溶液。溶于甲醇(10 mg/ml)和DMSO(50 mg/ml)。但鈉鹽和鉀鹽形式的D-熒光素能夠非常容易且快速的溶入水或者緩沖液中,使用方便,溶劑無(wú)毒性,特別適合體內(nèi)實(shí)驗(yàn)。配成液體后的這三種產(chǎn)品,在絕大多數(shù)的應(yīng)用上都沒(méi)有實(shí)質(zhì)性的差別。

                    產(chǎn)品性質(zhì)

                    中文別名(Chinese synonym)

                    D-熒光素鉀鹽

                    英文別名(English synonym)

                    (S)-4,5-Dihydro-2-(6-hydroxy-2-benzothiazolyl)-4-thiazolecarboxylic acid potassium salt; D-Luciferin firefly, potassium salt;

                    CAS號(hào)(CAS NO.)

                    115144-35-9

                    分子式(Formula)

                    C11H7N2O3S2 K

                    分子量(Molecular weight)

                    318.42 g/mol

                    外觀(Appearance)

                    淡黃色粉末

                    溶解性(Solubility)

                    溶于水(60 mg/ml)

                    純度(Purity)(HPLC)

                    >99%

                    運(yùn)輸與保存方法

                    冰袋運(yùn)輸。-20℃保存,保質(zhì)期12個(gè)月。

                    使用方法

                    1.體外生物發(fā)光檢測(cè)

                    1)用蒸餾水溶解D-熒光素鉀鹽,配制成100 mM的儲(chǔ)存液(200×,濃度30mg/ml)。混勻后立即使用或分裝于-20℃或-80℃凍存,避免反復(fù)凍融。

                    2)用預(yù)熱好的組織培養(yǎng)基1:200稀釋儲(chǔ)存液,配制工作液(終濃度150µg/ml)。

                    3)去除培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基直至無(wú)殘留。

                    4)待圖像分析前,向細(xì)胞內(nèi)添加1×熒光素工作液,然后進(jìn)行圖像分析(或者細(xì)胞放在37℃短時(shí)間孵育后檢測(cè)可增強(qiáng)信號(hào))。

                    2.    活體成像分析

                    1)用無(wú)菌的DPBS(w/o Mg2+)配制D-熒光素鉀鹽工作液(15mg/ml),0.2µm濾膜過(guò)濾除菌。混勻后立即使用或分裝于-20℃或-80℃凍存,避免反復(fù)凍融。一旦使用,放到4℃解凍,保持冰冷且避光。

                     2) 注射量取決于注射方式,具體如下:

                    注射方式

                    劑量

                    靜脈注射(25-27gauge針頭)

                    按10µl/g體重濃度,加入相應(yīng)體積的15mg/ml熒光素工作液

                    腹腔注射(25-27gauge針頭)

                    按10µl /g體重濃度,加入相應(yīng)體積的15mg/ml熒光素工作液

                    肌肉注射(27gauge針頭)

                    50µl,濃度為1-2mg/ml熒光素工作液

                    鼻內(nèi)注射(pipette)

                    50µl,濃度為3mg/ml熒光素工作液

                    3) 注射入體內(nèi)10-20 min(待光信號(hào)達(dá)到zui強(qiáng)穩(wěn)定平臺(tái)期),再進(jìn)行成像分析。

                    注:建議對(duì)每只動(dòng)物模型都需要建立熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線,從而確定zui高信號(hào)檢測(cè)時(shí)間和信號(hào)平臺(tái)期。

                     注意事項(xiàng)

                    1) 本品(firefly luciferin)和甲蟲(chóng)熒光素(beetle luciferin)都是指化合物(S)-2-(6-Hydroxy-2-benzothiazolyl) -2-thiazoline-4-carboxylic acid,僅僅是不同公司在命名上的差異。

                    2) 本品保存和操作的過(guò)程中都要避光。另外水溶性儲(chǔ)存液過(guò)濾除菌后,可以-20℃或-80℃分裝凍存,避免反復(fù)凍融。如果有條件,對(duì)儲(chǔ)存液充氮?dú)饣驓鍤猓ǚ乐寡趸€(wěn)定性和保存時(shí)間更長(zhǎng),長(zhǎng)達(dá)1年。

                    3) 注射方式,動(dòng)物類型以及體重等都會(huì)影響信號(hào)的發(fā)射,因此建議每次實(shí)驗(yàn)都要做熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線,確定*信號(hào)平臺(tái)期和*的檢測(cè)時(shí)間。

                    4) 熒光素鉀鹽和熒光素鈉鹽應(yīng)用上沒(méi)有差別,兩者的差別在于物理性狀上如外形和溶解性。鈉鹽的水溶性高于鉀鹽。從目前發(fā)表的文獻(xiàn)來(lái)看,鉀鹽的使用率遠(yuǎn)高于鈉鹽,尤其是體內(nèi)實(shí)驗(yàn)。兩者功效相同。

                    5) 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

                     

                    1、 熒光素可以用于動(dòng)物活體嗎?

                    答:我們?cè)S多客戶用熒光素作用于動(dòng)物活體,目前世界上合成熒光素主要有兩大生產(chǎn)商,因此目前您使用的就是這兩種生產(chǎn)商其中之一生產(chǎn)的。請(qǐng)注意:Promega出售的熒光素是Beetle Luciferin,而我們公司出售的是Firefly Luciferin,但這兩種的結(jié)構(gòu)是相同的(結(jié)構(gòu)式如下)。

                     

                    2、 怎么溶解熒光素?溶解后怎樣使它穩(wěn)定?

                    答:許多客戶已經(jīng)告訴我們熒光素溶于水中,然后分裝好保存于-80℃,不會(huì)有重大的影響。然而,關(guān)于溶解后熒光素的穩(wěn)定性也有相矛盾的報(bào)道。對(duì)于大多敏感的實(shí)驗(yàn),為了減少一些實(shí)驗(yàn)中的可變因素我們強(qiáng)烈建議您現(xiàn)配現(xiàn)用(比如低濃度的酶或者不合適的反應(yīng)溫度或不合適的鹽濃度等等可能需要高濃度的底物來(lái)驅(qū)使反應(yīng)的完成。)

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